cDNAディスプレイ技術
- cDNAディスプレイ法とは
- cDNA displayとは、弊社の有するタンパク質ディスプレイ方法であり、高い安定性と多様性を持った表現型―遺伝型対応付け技術です。
- cDNA displayのアドバンテージ
- 提示タンパク質の制限
- 毒性タンパク質の提示も可能
- 従来の細胞や微生物を使ったディスプレイ法では困難な細胞毒性を示すタンパク質の提示が可能。
- 安定性
- 高い安定性
- 提示タンパク質がリンカーでcDNAと結合しているため、 リボソームディスプレイやmRNAディスプレイに比べ、pHや湿度、RNaseの影響を受けづらい。
- 多様性
- 高い多様性
- 10¹³⁻¹⁴の高い多様性を扱うことができる。
- 各ディスプレイ方法との比較
ディスプレイ法 構造 遺伝型 多様性(/ml) 酵母ディスプレイ プラスミドDNA 10⁸ ファージディスプレイ ssDNA 10⁸ cDNAディスプレイ cDNA 10¹³⁻¹⁴ リボソームディスプレイ mRNA 10¹³ mRNAディスプレイ mRNA 10¹³
- EME独自のリンカー技術
- ピューロマイシンによる遺伝子化型分子と表現型分子の連結(= 対応付け)様式
- mRNA-cnvKリンカー調製後、これを無細胞翻訳系に投入します。リボソームがmRNAの5’末端側からタンパク質またはペプチド合成反応(= 翻訳反応)を開始し、ポリペプチド鎖が合成されていきます。翻訳反応が終盤にさしかかり、リボソームがmRNAの3’末端付近まで進むと、リボソームはcnvKリンカー直前で停滞します。この時近傍に存在しているピューロマイシン(アミノアシル-tRNA類似体)がリボソーム内に取り込まれると、ぺプチド転移反応が起こりそれまでに合成されたポリペプチド鎖のC末端とピューロマイシンリンカーが共有結合により連結されます。結果として形成される複合体は、mRNA-cnvKリンカー-タンパク質/ペプチドとなります。
当社では、独自の特殊リンカー「光架橋ピューロマイシンリンカー(cnvKリンカー)」や、「cDNAディスプレイ自動合成装置」を用い、1013-14の多様性を持ったcDNAディスプレイライブラリを自動調製します。